人血小板激活因子(PAF)酶聯(lián)免疫試劑盒
試驗(yàn)原理:
本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知待測(cè)物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將待測(cè)物質(zhì)和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:
(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);
(3)酶的底物;
(4)陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品(定性測(cè)定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測(cè)定中);
(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;
(6)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
(7)酶反應(yīng)終止液,常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的*終體積而異,在板式ELISA中一般采用2mol/L。

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的計(jì)算處理方法
1、擬和曲線:
輸入行: 濃度值, 如0 10 50 100 400
輸入第二行:該濃度下的調(diào)整后的od值,如0 0.586 1.397 1.997 3.42
選擇這些輸入的數(shù)據(jù),用插入里的圖表按鈕,進(jìn)入圖表向?qū),?ldquo;標(biāo)準(zhǔn)類型”中選擇“xy散點(diǎn)圖”;在“子圖表類型”中選擇“折線散點(diǎn)圖”,按“下一步”;選擇“系列產(chǎn)生在行”,按“下一步”;數(shù)據(jù)標(biāo)志,可以填寫:如數(shù)據(jù)y軸,OD值;數(shù)據(jù)x軸,濃度;按下一步,點(diǎn)擊完成?傻们圖。
單擊曲線,按右鍵,選擇“添加趨勢(shì)線”,在類型中,選擇多項(xiàng)式;在選項(xiàng)中,選擇顯示公式,選擇顯示R平方值。
得到公式和R平方值。
也可以用上面說的方法: 雙擊圖表,把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中,就可以擬和曲線。
2、計(jì)算濃度:
次實(shí)驗(yàn):
標(biāo)準(zhǔn)曲線為:
y = -4E-05x2 + 0.026x
R2 = 0.9745
為例,已知OD值,計(jì)算濃度。
由于y = -4E-05x2 + 0.026x,可以得到:
4E-05x2 -0.026x +y=0
ax2 +bx +y=0
特別說明:
#.一周內(nèi)使用可存于4℃,需長時(shí)間存放或多次使用建議存于-20℃.
化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒
1.在各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品各100μL,37°C孵育90分鐘
2.倒去孔內(nèi)液體,拍干,加入100μL生物素化抗體工作液,37°C孵育 60分鐘
3.洗滌3次
4.加入 100μL酶結(jié)合物工作液,37°C孵育 30分鐘
5.洗滌5次
6.加入100μL 發(fā)光底物混合液,37°C孵育5分鐘左右
7.立即測(cè)定各孔的化學(xué)發(fā)光值
8.結(jié)果計(jì)算
ELISA試劑盒優(yōu)勢(shì):
1、抗體----高效、靈敏、特異性好
2、規(guī)范包被操作----吸附均勻、吸附性好、空白值低、孔底透明度高
3、優(yōu)化方案----重復(fù)性高,可靠性強(qiáng)
4、高標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)要求:靈敏度高,特異性強(qiáng)
5、適用范圍廣:血漿、血清、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等多種類型的樣本
ELISA試劑盒操作步驟:
1.使用,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2.根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8.取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9.在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值。
服務(wù)承諾:
一、產(chǎn)品品質(zhì)保障(打造高品質(zhì)產(chǎn)品,若產(chǎn)品質(zhì)量存在任何問題,公司一律包退包換,質(zhì)量有保障,解除了客戶的后顧之憂)
二、提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)(我司擁有業(yè)酶免技術(shù)的工作人員為客戶提供來樣檢測(cè)服務(wù),限度實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性)
三、提供全程技術(shù)指導(dǎo)(業(yè)的科順技術(shù)人員進(jìn)行指導(dǎo))
四、全天在線服務(wù)(如果您在使用ELISA試劑盒產(chǎn)品時(shí)有任何的疑問,或者對(duì)我們有任何意見建議,您都可以通過來電或咨詢。)
[說明]
1.由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。
2.終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),請(qǐng)務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。
3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別,如:檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等,請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。
4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說明才會(huì)得到佳的檢測(cè)結(jié)果。
5.本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請(qǐng)使用者使用充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。
6.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
7.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等,所以可能存在檢測(cè)不出的情況。
8.某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測(cè)出。
ELISA檢測(cè)試劑盒承諾
公司長期與各大高校、醫(yī)院及權(quán)威科研單位保持著良好的合作關(guān)系,公司的產(chǎn)品質(zhì)量及服務(wù)態(tài)度得到了他們的一致認(rèn)可。篤瑪生物本著客戶至上的原則為客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品,公司承諾產(chǎn)品有任何質(zhì)量的問題免費(fèi)包退換(非人為因素造成的)。公司提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),并且承諾收到樣本七個(gè)工作日出結(jié)果,確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。